{ "title": "C Dna Nedir", "image": "https://www.hucreler.gen.tr/images/c-dna-nedir-5457.jpg", "date": "20.01.2024 16:21:17", "author": "irfan özen", "article": [ { "article": "C DNA Nedir, C DNA terimiyle ilgili olarak farklı kaynaklardan yaptığımız araştırmalarda edindiğimiz bilgiler aşağıda verilmiştir. C Dna kısaca Biyoloji ve Veteriner alanlarında kullanılan ve teknik bir terim olarak tamamlayıcı DNA anlamına gelmektedir.

Tamamlayıcı Dna: Komplementer DNA'ya da C Dna, genetik bilimde, ters transkriptaz enzimiyle kataliz olan bir reaksiyonda şablon şeklinde kullanılan olgun bir mRna'dan sentezlenen DNA paçasına verilen addır. C Dna genel olarak ökaryot genlerini prokaryotlar için klonlamada sık sık kullanılır. C Dna, bundan ayrı bir provirüs oluşturmak üzere konağıyla bütün olan (Hiv-1, Hiv-2, Siv vb. Gibi) retrovirüsler tarafından da üretilmektedir.

C DNA Sentezi: İyi bir C DNA sentez için yüksek saflıkta Rna ile çalışılması gerekir. Rna spektrofotometrik şekilde ölçülerek saflık miktarına bakılır. Ayrıca bu Rna çalışmaya uygun bir uzunlukta ve Edta (Etilen diamin tetra asetik asit) veya SDS(Sodyumdodesilsülfat) benzeri revers transkriptaz enzimini inhibe eden inhibitörleri içeriği olmamalıdır.

C DNA Sentezinin Reaksiyonları: random hegzamer primerler, oligo (DT) primerler ya da gen spesifik primerler (Gsp) kullanılır ve sentez için Retrovirüslerden kazanılan Amv (Avian Myleoblastosis Virus) ile Mmlv (Moloney murine leukemia virus) virüse dahil revers transkriptas enzimleri kullanılmaktadır. Rt - Pcr tek veya iki adımlı olarak gerçekleştirilir. İki adımlı Rtpcr'da Rt tamponunda C Dna sentezi oluşur. Sentezlenen C Dna 1/10'u Pcr için kullanılmaktadır. Geri kalan C DNA ise–80 °C'de muhafaza edilir. İki ya da tek adımlı halde Pcr işlevi gerçekleşir. İki adımlı Rt-Pcr tek Rna misalinden çoklu mesajların tespiti için uygulanan yaygın ve kullanışlı bir usuldür. Bu usuldeki tek zincirli C DNA oligo (DT), random hekzamer ya da Gsp primerlerle eşleşir. Yararları ise amplifikasyon enzimi ve primerlerin seçilmesi, tek misalden oluşan değişik mesajların saptanıp, kantitasyonuna uygundur. Tek adımlı Pcr'da ise revers transkripsiyon ile Pcr aynı tüpte optimize yapılan şartlarda gerçekleşir. Bu yöntem çok miktarda Rna örneği var olduğunda daha kullanışlıdır. C Dna sentezi ve amplifikasyon içerisinde tüplerin kapatılmasına gerek olmaz çünkü adımın azalması kontaminasyon tehlikesini en aza düşürür. Tek zincirli Rna Gsp primerleriyle eşleşir. Daha az pipetleme ve daha az kontaminasyon riski mevcuttur. Kantitatif Pcr'a uygundur. Revers transkriptaz ve amplifikasyon enzimleri beraber çalışır ve yüksek hassasiyetli olur.
" } ] }